蛋白質(zhì)電泳和蛋白質(zhì)印跡

　　蛋白質(zhì)印跡是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是用特定抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣本染色。通過(guò)分析著色的位置和深度，可以獲得被分析細(xì)胞或組織中特定蛋白質(zhì)的表達(dá)信息。

　　SDS-PAGE凝膠試劑盒

　　貨號(hào) (SKU) 包裝規(guī)格

　　S665689-200gels　　200-300gels

　　S665689-40gels　　40-60gels

　　基本描述

　　英文名稱：SDS-PAGE Gel Kit

　　儲(chǔ)存溫：度2-8°C儲(chǔ)存

　　運(yùn)輸條件：冰袋運(yùn)輸

　　產(chǎn)品內(nèi)容

　　組分40-60 gels200-300 gels

　　30%Acr-Bis(29:1)100ml2×250ml

　　SDS-PAGE Separating Gel Buffer (4×)100ml500ml

　　SDS-PAGE Stacking Gel Buffer (4×)50ml250ml

　　APS0.5g2.5g

　　TEMED1ml5ml

　　本產(chǎn)品所提供的APS(過(guò)硫酸銨)為固體粉末，使用前加入純水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5 ml純水、2.5 g APS加25 ml純水)，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

　　產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備純水，即可制備高質(zhì)量各 種濃度的變性PAGE凝膠，方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中已 加入10%SDS，使用時(shí)不用另外加入。

　　SDS-PAGE凝膠試劑盒注意事項(xiàng)

　　1. 10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，每次取用后立即放回冰箱，以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換使用

　　-20度保存的10%APS。

　　2. PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關(guān);在其它條件不變的情況下，可通過(guò)改變APS及TEMED的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚合過(guò)快不利于操作;附表中的APS及TEMED量可供參考，應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

　　3. 在凝膠配制過(guò)程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

　　4. 在分離膠上層加純水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。

　　5. 丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。

　　6. 本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。

　　操作步驟

　　根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，最佳膠濃度請(qǐng)參考附表1。

　　I灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)

　　1.參照凝膠模具說(shuō)明書(shū)，裝配好凝膠模具。

　　注：加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。

　　2. 將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer和純水在小燒杯或試管中混合。

　　3. 加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

　　4. 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端

　　1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可)， 然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的水層， 使凝膠表面保持平整。

　　5. 靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

　　II 灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)

　　1. 去除覆蓋在分離膠上的水層。

　　2. 將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer和純水在一個(gè)小燒杯或試管中混合。

　　3. 加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

　　4. 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

　　5. 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

　　6. 靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。

　　7. 待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

　　8. 進(jìn)行常規(guī)電泳操作。