ELISA檢測中TGF-β1樣本處理方法簡介

　　近段時(shí)間以來，很多客戶來電詢問關(guān)于TGF-β1樣本的處理方法，為了更好的讓客戶了解整個(gè)過程，BUNSEN本生整理以供參考。

　　由于機(jī)體內(nèi)表達(dá)的 TGF-β1是無活性同型二聚體的前體分子，在機(jī)體外，無活性的TGF-β1又稱為latency associated peptide (LAP)，在酸性條件下進(jìn)行預(yù)處理即可獲得有活性的TGF-β1，從而用于ELISA檢測。

　　TGF-β1血清、血漿樣本的活化處理步驟

　　1、 取40 μL樣本，加入2 mL EP管或者西林瓶中。

　　2、 加入20 μL 1N HCl于渦旋儀上混合均勻，室溫靜置10 min

　　3、 加入20 μL 1N NaOH, 混勻。

　　4、 根據(jù)樣本實(shí)際情況，對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后進(jìn)行檢測。

　　注：樣本測值計(jì)算時(shí)應(yīng)乘以總體稀釋倍數(shù)(含活化稀釋和活化后稀釋)

　　TGF-β1細(xì)胞上清/尿液樣本的活化處理步驟

　　1、 取100 μL細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液， 加入20 μL 1N HCl于渦旋儀上混合均勻

　　2、 室溫靜置10 min

　　3、 加入20 μL 1N NaOH, 混勻后即可進(jìn)行檢測

　　提醒：以上兩個(gè)步驟中活化了的樣本需在2h內(nèi)完成檢測才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)基中的動(dòng)物血清可能含有一定濃度的TGF-β1，因此在檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清時(shí)，盡量選擇不含有動(dòng)物血清的細(xì)胞培養(yǎng)基。如若使用了含有動(dòng)物血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，務(wù)必將細(xì)胞培養(yǎng)基作為對照進(jìn)行檢測，確定培養(yǎng)基中TGF-β1的濃度，最終在計(jì)算細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TGF-β1濃度時(shí)減去培養(yǎng)基中TGF-β1的濃度方為實(shí)際樣本濃度

　　活化試劑的配制：

　　1、 1 N HCl (100mL): 將 8.33mL 的 12M HCl緩慢加入到 91.67mL 的去離子水中，混合均勻后即可使用。

　　2、 1N NaOH/0.5M HEPES (100mL)：將 10mL濃度為10M NaOH加入80mL的去離子水中，混合均勻后再加入 11.9g 的 HEPES，混勻，用去離子水定容至100mL備用.

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